Micropropagación de plantas

Introducción:

Una de las herramientas básicas en el desarrollo de la biotecnología en plantas es la micropropagación, llamada también clonación. La finalidad de esta técnica consiste en generar clones ( plantas idénticas genéticamente) a partir de hojas o partes de la planta, con esto es fácil la manipulación de un tejido o un grupo de células, de las cuales podemos obtener la planta, permitiendo la reproducción de mejores ejemplares.
En este trabajo practico clonaremos dos especies distintas pero muy útiles en el quehacer agrícola, la coliflor y el clavel.

Materiales y métodos:

· Corazón de coliflor
· Hojas de claves ( con tallo )
· Agua destilada estéril
· Agar o gelatina sin sabor
· Sacarosa
· Etanol al 70% ( se prepara con 30 ml de agua destilada con 70 ml de Etanol)
· Etanol al 10% ( se prepara con 90 ml de agua destilada con 10 ml de Etanol)
· Hipoclorito de Sodio ( cloro ) al 2.5 % ( se prepara con 50 ml de
hipoclorito con 50 ml de agua destilada , con gotas de detergente domestico)
· Jabón desinfectante
· Guantes quirúrgicos
· Cápsula de Petri
· Bisturí
· Pinzas mecánicas
· Papel aluminio
· Jarros de Vidrio 2 con tapa ( preferentemente 200 ml )
· Vasos precipitados
· Nutriente liquido para plantas
· Algodón
· Olla a presión

Metodología

Esterilización de material

Lave con abundante agua los jarros de vidrio, la cápsula de Petri y la pinzas, luego cubra la pinza con papel aluminio e inserte el material dentro de una olla a presión con una pequeña cantidad de agua, ponga a hervir por 25 minutos


Elaboración de soluciones:
Solución de etanol al 70%

Tome una botella limpia , agregue 300 ml de agua destilada y 700 ml de etanol puro, tape, agite e etiquete

Solución de etanol al 10%

Tome una botella limpia , agregue 900 ml de agua destilada y 100 ml de etanol puro, tape, agite e etiquete

Solución de Hipoclorito de Sodio
Tome una botella limpia, agregue 500 ml de hipoclorito de sodio y 500 ml de agua destilada, tape, agite e etiquete.

Solución de Funguicida

Según ordenes del proveedor, en una botella limpia tome 10 gramos y mezcle con 1000 ml de agua destilada, tape, agite e etiquete.
Tenga mucho cuidado con esta manipulación, lave sus manos con abundante agua y jabón después de manipular.

Solución de sacarosa al 0,2 %

En una botella limpia y esterilizada, tome 0.2 g de sacarosa con 100 ml de agua destilada


Elaboración del medio de cultivo

1. En un vaso precipitado, tome 2 gramos de agar con 100 ml de agua destilada ( agar al 2% p/v ), caliente en el mechero y tape la disolución con papel aluminio, ponga a esterilizar por 25 minutos en la olla a presión, este medio es para la coliflor. Si los jarros a utilizar son de 400 ml tome el doble de agar y agua.
2. En otro vaso, tome 2 gramos de gelatina sin sabor con 100 ml de agua destilada ( agar al 2% p/v ), caliente en el mechero y tape la disolución con papel aluminio, ponga a esterilizar por 25 minutos en la olla a presión, este medio es para el clavel. Si los jarros a utilizar son de 400 ml tome el doble de gelatina y agua.
3. Agregue cada medio, bajo condiciones de esterilidad ( bajo el mechero ), a un jarro de vidrio esterilizado.
4. Espere 15 minutos para que solidifiquen los medios
5. Agregue a cada medio 5 gotas de nutriente liquido y una gota de disolución de sacarosa al 0,2 % p/v ( preparado previamente ), en condiciones de esterilidad extrema.
6. Espere tres días para observar si existe contaminación.

Cultivo de las plantas

Cultivo de clavel

1. Limpie bien el mesón a trabajar con Etanol al 70%.
2. Sumerja hojas de clavel con tallo a un vaso con funguicida por 2 horas
3. Lave bien con agua corriente
4. Sumerja los tallos en la solución de etanol al 10% por 5 minutos, agitando constantemente.
5. Enjuague tres veces tres minutos con agua destilada
6. Enjuague 10 minutos en la solución de hipoclorito de sodio al 2,5 %
7. Enjuague tres veces seis minutos con agua destilada
8. Bajo el mechero, sumerjan la pinza mecánica en la solución de etanol 70 % y tome un tallo, rápidamente insértelo hasta la mitad de la gelatina, 4 tallos por cada frasco, tape el jarro pero no herméticamente
9. El frasco debe mantenerse en un lugar iluminado y a temperatura media
10. El crecimiento debe evidenciarse en 14 días


Cultivo de coliflor

1. Limpie bien el mesón a trabajar con Etanol al 70%.
2. En condiciones esteriles, dentro de la placa de petri, corte trozos del centro de la coliflor.
3. Sumerja los trozos de coliflor en un vaso con funguicida por 5 minutos
4. Lave bien con agua corriente
5. Sumerja los tallos en la solución de etanol al 10% por 5 minutos, agitando constantemente.
6. Enjuague tres veces seis minutos con agua destilada
7. Enjuague 20 minutos en la solución de hipoclorito de sodio al 2,5 %
8. Enjuague tres veces seis minutos con agua destilada
9. Bajo el mechero, sumerjan la pinza mecánica en la solución de etanol 70 % y tome un trozo, rápidamente insértelo hasta la mitad de la gelatina, 4 trozos por cada frasco, tape el jarro pero no herméticamente
10. El frasco debe mantenerse en un lugar iluminado y a temperatura media
11. El crecimiento debe evidenciarse en 10 días